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m6A表观遗传修饰丨病毒RNA分离快速试剂盒

放大字体 缩小字体 发布日期:2021-02-02 10:58:28 来源:互联网
 说到病毒,拿我们现在贼讨厌的新冠病毒COVID-19: SARS-coV-2来举例,它的遗传物质是RNA。如果SARS-CoV-2大流行给我们带来了任何启示,那么对RNA修饰的研究现在比以往任何时候都更加重要。 这是否意味着要研究病毒RNA本身以更多地了解不同的改变和表观遗传学变化如何使这些病毒更具弹性和更具感染力,或者研究从细胞和组织中收集的RNA以了解这些不同病原体对宿主细胞功能的影响,这项研究努力几乎是无尽的。

一 m6A修饰对RNA病毒生命周期的影响

 

已知表观遗传修饰会影响人冠状病毒等RNA病毒的生命周期。据报道,像N6-甲基腺苷(m6A)这样的修饰腺苷通过调节病毒帽结构、病毒基因表达、病毒子代、先天性感应途径和先天性免疫反应来影响特定RNA病毒的生存能力。m6A的获得或丧失可导致RNA病毒发生显著的功能变化,改变宿主细胞的融合/进入、复制、传播、病原体强度和免疫逃避。宿主细胞的m6A表型组在宿主抵抗力中起着重要作用,病毒感染后也可发生改变。SARS-CoV-2基因组长度超过29800个核苷酸,根据RNA甲基化酶复合物METTL3/14对m6A修饰的特定序列座的存在,包括GGACU(T)、GGACA和GGACC,包含50多个潜在的m6A位点。因此,SARS-CoV-2 RNA中>0.64%的腺苷,或0.18%的碱基可能是m6A。因此,总RNA中m6A的定量和全转录组m6A图谱的绘制对于研究m6A相关的病毒功能和相应的机制,以及确定新的抗病毒治疗靶点至关重要。

 

二 病毒RNA提取

 

无论您是从细胞,组织还是病毒的样品开始,有效的RNA分离通常是成功进行实验的步。对于病毒:另一方面,当涉及病毒样品时,诸如病毒滴度低和污染性宿主核酸的高存在之类的挑战需要使用补充技术来确保产量和纯度符合下游要求。在我们zui近的公告文章中,我们概述了可以完成此操作的10种方法,因此您可以将其应用到zui适合您的学习的方法中。一种方法是接种细胞培养物进行病毒扩增,然后收集扩增的病毒体,以与EpiGentek的病毒RNA提取试剂盒一起使用。注意:对于直接从临床标本中提取的病毒RNA,在m6A RNA富集之前,需要额外的处理以去除共提取的宿主DNA和rRNA污染物。

 

三 病毒RNA提取试剂盒

 

病毒RNA提取产品我们主要有2种:RNA稳健的旋转柱和磁性试剂盒我们的每一个试剂盒都是为了提取高质量的RNA而设计的,除了用于RT-PCR之外,还可以用于其他下游应用。我们的试剂盒在提取方法以及通量选项(高/手动)的类型上有所不同,因此无论您的实验室需要什么,我们的试剂盒都可以帮助您获得随时可用的纯化病毒RNA。我们的各种磁珠和自旋柱试剂盒可以从不同的样品来源(鼻腔/鼻咽拭子、细胞/组织)和物种(病毒、哺乳动物)中分离RNA。洗涤剂和潮解盐用于裂解细胞和灭活RN酶。专门的高盐缓冲系统使RNA碱基与磁珠结合到自旋柱的玻璃纤维基质上,同时污染物被有效地洗去。纯核酸用水缓冲液洗脱,不需要苯酚提取或酒精沉淀。具体操作流程如下:


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货号

产品名称

描述

P-9107
(旋转柱)

EpiQuik Viral RNA Isolation Fast Kit

EpiQuik病毒RNA分离快速试剂盒是一整套优化的缓冲液和试剂,适用于从无细胞液体样本(不包括血浆和血清),特别是唾液和鼻咽或鼻咽拭子中快速制备病毒RNA。旋转柱法纯化。10min。

P-9108
(磁珠法)

EpiMag Viral RNA Isolation Kit (Magnetic Beads)

适用于从无细胞液体样品(不包括血浆和血清),特别是唾液和鼻咽或鼻咽拭子中快速制备病毒RNA,磁珠法,25min。

P-9109
(磁珠法)

EpiMag 96-Well Viral RNA Extraction Kit (High Throughput)

适用于从无细胞液体样品(不含血浆和血清)中制备磁珠,以高通量方式快速制备病毒RNA。 ),高通量,磁珠法,30min。

 

结果:

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