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目前已经克隆和测序的杀稻瘟菌素耐受基因有3种,一种是分离自产生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基转移酶基因bls,另外两种是脱氨酶基因,包括从Bacillus cereus 中分离的bsr和从Aspergillus terreus 中分离的BSD 基因。Bsr和 BSD 基因是zui常用的筛选标志,用于哺乳动物和植物细胞的基因转移实验,也可用于E.Coli。
作为专业的生命科学产品与方案供应商,艾美捷科技为您推荐这款,备受客户青睐的科研的Blasticidin S,杀稻瘟菌素S(灭瘟素)试剂:
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1)Escherichia coli应用浓度
Ecoli对Blasticidin S的敏感性稍差,但是转化子对Blasticidin S具有耐受性,可以用低盐LB培养基(pH 8)进行筛选,浓度范围为50-100 ug/mlBlasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。
2)哺乳动物细胞,应用浓度
哺乳动物细胞中Blasticidin S的工作浓度范围在1-50 ug/ml(通常为10 ug/ml)。初次实验建议通过灭杀曲线来确定zui佳使用浓度。一些哺乳动物细胞的建议工作浓度:
Blasticidin S,杀稻瘟菌素S(灭瘟素)试剂操作步骤(哺乳动物稳转株筛选)
1)转染后48h,用含有适宜浓度Blasticidin S的新鲜培养基将细胞传代(注:细胞处于活跃分裂期时抗生素工作zui好。细胞密度太高,抗生素效率降低。细胞分盘时覆盖率zui好不超过25%)。
2)每3-4天去除培养基,加入含抗生素的新鲜培养基。
3)7天后检测细胞集落形成。根据宿主细胞种类和转染/筛选效率,集落形成可能需要增加一周或更久。
4)转移5-10个耐受克隆到35 mm细胞盘中,加入选择培养基维持培养7天。随后用细胞毒性实验进行检测。
https://www.amyjet.com/featured/blasticidin-s.shtml