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弹力素S――Blasticidin S杀稻瘟菌素S(灭瘟素)

放大字体 缩小字体 发布日期:2021-01-22 10:30:09 来源:互联网
 Blasticidin S杀稻瘟菌素S(灭瘟素)是一种多肽核苷类抗生素。它首先从S.griseochromogenes中分离出来。利用衍射仪数据确定了五水合物形式的结构,与抗生素阿米西汀相似,亲水和疏水基团位于分子的两侧。此后利用全合成法创造了它。在研究中,Blasticidin S用于筛选携带有bsr或BSD耐受基因的转染细胞。杀稻瘟菌素具有快速而强效的作用模式,很低的抗生素浓度便能导致细胞迅速死亡。

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目前已经克隆和测序的杀稻瘟菌素耐受基因有3种,一种是分离自产生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基转移酶基因bls,另外两种是脱氨酶基因,包括从Bacillus cereus 中分离的bsr和从Aspergillus terreus 中分离的BSD 基因。Bsr和 BSD 基因是zui常用的筛选标志,用于哺乳动物和植物细胞的基因转移实验,也可用于E.Coli。

 

作为专业的生命科学产品与方案供应商,艾美捷科技为您推荐这款,备受客户青睐的科研的Blasticidin S,杀稻瘟菌素S(灭瘟素)试剂:

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更多,推荐参考资讯:

 

1)Escherichia coli应用浓度

Ecoli对Blasticidin S的敏感性稍差,但是转化子对Blasticidin S具有耐受性,可以用低盐LB培养基(pH 8)进行筛选,浓度范围为50-100 ug/mlBlasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。

 

2)哺乳动物细胞,应用浓度

哺乳动物细胞中Blasticidin S的工作浓度范围在1-50 ug/ml(通常为10 ug/ml)。初次实验建议通过灭杀曲线来确定zui佳使用浓度。一些哺乳动物细胞的建议工作浓度:

 

Blasticidin S,杀稻瘟菌素S(灭瘟素)试剂操作步骤(哺乳动物稳转株筛选)

 

1)转染后48h,用含有适宜浓度Blasticidin S的新鲜培养基将细胞传代(注:细胞处于活跃分裂期时抗生素工作zui好。细胞密度太高,抗生素效率降低。细胞分盘时覆盖率zui好不超过25%)。

2)每3-4天去除培养基,加入含抗生素的新鲜培养基。

3)7天后检测细胞集落形成。根据宿主细胞种类和转染/筛选效率,集落形成可能需要增加一周或更久。      

4)转移5-10个耐受克隆到35 mm细胞盘中,加入选择培养基维持培养7天。随后用细胞毒性实验进行检测。

 

https://www.amyjet.com/featured/blasticidin-s.shtml

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